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卡那霉素酶聯(lián)免疫試劑盒說明書
更新時間:2019-05-05 點擊量:1977


 

 

卡那霉素酶聯(lián)免疫試劑盒說明書

 

 

藥物概述及檢測原理

 

卡那霉素是氨基糖甙類藥物,被廣范應用于動物疾病的治療,由于其具有神經毒性和腎臟毒性,歐美國家及我國均要求其*使用。

本公司的卡那霉素酶聯(lián)免疫試劑盒使用新一代生物技術開發(fā),具有方便、快速、靈敏等特點

本試劑盒利用卡那霉素抗體與卡那霉素可產生特異性結合的性質,先在酶標板上預包被抗原,再加入標準品(樣本)和卡那霉素抗體工作液,樣本或標準品中的卡那霉素藥物與包被抗原競爭卡那霉素抗體,后加入底物催化顯色。此時顯色深度與標準品(樣本)中卡那霉素藥物的含量成反比。

 

  • 試劑盒內包含組分:

 

  1. 標準品工作液:0 ppb、0.2 ppb、0.6 ppb、1.8ppb、5.4 ppb、16.2ppb,
  2. 1 mL/瓶
  3. 96孔酶標板:1塊
  4. 卡那霉素抗體工作液:1瓶(7mL/瓶
  5. 酶標二抗工作液:1瓶(7mL/瓶
  6. 20×濃縮洗滌液:1瓶(30 mL/
  7. 20×濃縮組織復溶液:1瓶(10 mL/
  8. 10×濃縮蜂蜜復溶液:1瓶(10 mL/
  9. 底物A液1瓶(7 mL/瓶
  10. 底物B液1瓶(7 mL/瓶
  11. 終止液:1瓶(7mL)
  12. 說明書
  13. 蓋板膜
  • 用戶需要自備的設備和試劑

 

儀器

  1. 酶標儀(檢測波長450 nm、630 nm)
  2. 電子天平(精度:0.01 g)
  3. 離心機(4000 g及以上
  4. 生化培養(yǎng)箱可調25℃)
  5. 搖床
  6. 旋渦振
  7. 微量移液器20μl-200μl、100μl-1000μl各一支、30-300ul八道排槍
  8. 計時器

試劑:試劑均為分析純

  1. 氫氧化鈉
  2. 氯化鈉
  3. 氯化
  4. 磷酸二氫鉀
  5. 十二水合磷酸氫二鈉
  6. 去離子水

 

  • 試劑盒特異性

   試劑盒與其他藥物的交叉反應率

  1. 卡那霉素………………………100%
  2. 大觀霉素、鏈霉素、替米考星<0.1%

 

  • 樣本檢測步驟
  1. 工作液準備
  1. 組織復溶工作1份20×濃縮組織復溶去離子水19按照1:19的比例稀釋即得
  2. 蜂蜜復溶工作1份10×濃縮蜂蜜復溶去離子水9按照1:9的比例稀釋即得。
  3. 緩沖液: 0.1M PBS溶液(PH=10-11)  稱取13.4g十二水合磷酸氫二鈉.20g氯化鈉.0.32g氫氧化鈉.0.5g磷酸二氫鉀.0.5g氯化鉀加去離子水溶解定溶至500ml。
  1. 1 M鹽酸溶液量取1ml濃鹽酸加去離子水11ml溶解混勻即得。
  1. 洗滌工作液1份20×濃縮洗滌液去離子水19份按照1:19的比例稀釋即得
  1. 樣品前處理

組織(雞肉、豬肉)(稀釋數(shù):20

  • 稱取1.0±0.05g均質樣本至50ml聚苯乙烯離心管,加入3ml緩沖液見配液5.1),上下顛倒振搖5min;
  • 放入60℃水浴環(huán)境中60min,取出4000g以上,室溫離心10min
  • 移取上清液100ul,加入400ul組織復溶工作液(見5.1中渦旋20s
  • 50ul用于分析。

 

蜂蜜(稀釋數(shù):15

  • 稱取1.0±0.05g蜂蜜樣本至50ml塑料離心管中;
  • 加入2ml 去離子水,強烈震搖2min (或使用渦動儀渦動1min);
  • 取100μL上清液至400μL蜂蜜復溶工作(見5.1中,充分渦動30s;
  • 取50 μL液體進行分析。

   液態(tài)奶樣本方法一(稀釋數(shù):10(同四環(huán)素液態(tài)奶方

   法一致)

  • 樣好的液態(tài)奶樣本解凍后于室溫靜置平衡30min以上;
  • 將槍頭伸入原奶樣本下層,小心取出1ml樣本加入2ml離心管中注意:盡量不要取到上層的奶油);
  • 加入50μL 1M鹽酸(見5.1強烈震搖1min (或使用渦動儀渦動30s);
  • 使用離心機室溫4000 g以上離心10 min;
  • 取上層清亮液體50μL加入另一干凈離心管中(注意:盡量不要取到上層的奶油),再加入450μL組織復溶工作(見5.1,強烈震搖1min (或使用渦動儀渦動30s);
  • 取50 μL液體進行分析。

   液態(tài)奶樣本方法二(稀釋數(shù):40(同四環(huán)素液態(tài)奶方法

   一致)

  • 50ul液態(tài)奶樣品于1950ul組織復溶工作(見5.1中;
  • 充分渦動1 min混勻;
  • 立即取50ul進行檢測。

 

  1. 檢測
  • 準備:要使用的酶標板條插入酶標板架上,并記錄各標準品和樣品的位置,為減小檢測值波動建議做雙孔平行實驗(每個樣本/標準品點兩孔,未使用的酶標板條用自封袋密封后,保存于2-8℃環(huán)境中以防變質;
  • 加樣:向對應微孔中加入標準品工作液/樣品溶液50 μL,向每孔中加入50 μL酶標二抗工作液,再向每孔中加入50 μL抗體工作液,;
  • 孵育:輕輕振蕩酶標板10 s,使孔內液體充分混勻,蓋好蓋板膜25℃避光反應20 min;
  • 洗滌:取出酶標板后小心揭開蓋板膜,板孔中液體后,在每孔加 250 μL洗滌工作液,浸泡15-30s后倒掉洗滌工作液,然后再加入洗滌工作液重復洗滌3~4,將酶標板倒置于吸水紙上,用力拍干;
  • 顯色:在每孔中加入100 μL 底物A和底物B混合液注:底物A液、底物B液必須按體積1:1充分混合,混合液在10 min內使用,切不可使用金屬容器盛裝、攪拌試劑以免底物變質失效)
  • 孵育:輕輕振蕩酶標板10 s,使孔內液體充分混勻,蓋好蓋板膜25℃避光反應10 min;
  • 終止:在反應后的微孔中加入終止液50μL/孔,底物液由藍變黃表明終止成功。
  • 讀數(shù):終止后的酶標板應在5 min內用酶標儀讀數(shù),建議使用450 nm、630 nm雙波長讀取酶標板吸光度值。
  1. 計算結果
  • 各標準品(或樣品)的吸光度平均值B,零標(濃度為0 ppb的標準品)吸光度平均值B0以(B/B0100%各標準品(或樣品)對應的吸光度的百分比:
  • 使用半對數(shù)系統(tǒng)代入標準品對應的吸光度的百分比,與標準品濃度擬合標準曲線。
  • 將待檢樣品吸光度的百分比代入擬合出的標準曲線方程中,可得出樣品對應的濃度,乘以樣品相應的稀釋倍數(shù),即可得出樣品中檢測物含量。

 

  • 試劑盒參數(shù)
  • 試劑盒靈敏度0.2 ppb
  • 標準曲線范圍0.2 ppb-16.2 ppb;
  • 板內變異系數(shù):<5%;
  • 板間變異系數(shù):<15%
  • B0吸光度理想>0.8;
  • 回收率90%±30%
  • 樣品低檢測限:

    豬肉、雞肉…………約6ppb

    蜂蜜…………………約5ppb

        液態(tài)奶樣本方法一…約5ppb

        液態(tài)奶樣本方法二10ppb

注:ppb=ng/mL或ng/g。

 

  • 分析限制

   本試劑盒為定量或半定量試劑盒,建議用于大量樣本篩查分析若檢測結果為陽性,建議使用儀器方法開展確證實驗(如GC/MS、LC-MS/MS等)。

 

  • 試劑盒貯存條件
  • 試劑盒貯存溫度為2-8℃,切勿凍存
  • 未使用完的酶標板條須密封保存2-8℃的環(huán)境中。

 

  • 注意事項
  • 使用試劑盒前,請務必仔細閱讀說明書。
  • 試劑盒使用前,需將盒內各組份置于實驗臺上回溫至室溫(25±2℃)(提示:約1 h)。
  • 試劑在使用前搖勻,混合時應避免出現(xiàn)氣泡。
  • 槍頭為一次性用品,為防止試劑交叉污染,檢測過程中所用槍頭不得重復使用。
  • 請勿使用過期試劑盒,不同批號試劑盒中的試劑不得混用。
  • 樣品處理完畢后請立即分析,否則可能影響檢測結果。
  • 底物A液、底物B液均為無色透明液體,若在使用前已變成藍色,或混合后立即變藍,說明試劑已污染或變質。
  • 加樣過程在保證精度的前提下一定要迅速,以免反應時間差對檢測結果產生影響。
  • 終止液中含有硫酸,若不小心濺上皮膚或衣物請立即用大量清水沖洗。若不慎入眼,請在*清洗后去醫(yī)院檢查。

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滬公網安備 31011802001677號

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