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多酚氧化酶檢測(cè)試劑盒(PPO)說明書
更新時(shí)間:2020-07-15 點(diǎn)擊量:2333

                                               規(guī)格:50管/24樣

多酚氧化酶檢測(cè)試劑盒(PPO)說明書

可見分光光度法

產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

PPO主要存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,是一種含銅的氧化酶,能使一元酚和二元酚氧化產(chǎn)生醌,從而引起褐化,與果蔬加工、茶葉品質(zhì)和組培等密切相關(guān)。

PPO能夠催化鄰苯二酚產(chǎn)生醌,后者在525nm有特征光吸收。

試驗(yàn)中所需的儀器和試劑:

可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1ml玻璃比色皿、研缽、冰蒸餾水

產(chǎn)品內(nèi)容:

提取液:液體,60ml×1瓶,4保存;

試劑一:液體40ml×1瓶,4保存;

試劑二:液體,10ml×1瓶,4保存;

試劑三:液體20ml×1瓶,4保存

操作步驟:

  • 粗酶液提取:   

1、收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照每200萬細(xì)菌或細(xì)胞加入400μl提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(功率20%,超聲3秒,間隔10秒,重復(fù)30次);8000g 4離心10分鐘,取上清,置冰上待測(cè)。

2、稱取約0.2g組織,加入1ml提取液進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4離心10分鐘,取上清,置冰上待測(cè)。

二、測(cè)定操作表:

試劑名稱(μl

測(cè)定管

對(duì)照管

試劑一

600

600

試劑二

150

150

樣本

150

 

煮沸的樣本

 

150

37(哺乳動(dòng)物)25(其它物種)中準(zhǔn)確水浴10min后,迅速放入冰浴中冷卻

試劑三

300

300

充分混勻,5000g,常溫離心10min,收集上清,用蒸餾水調(diào)零,525nm處檢測(cè)測(cè)定管和對(duì)照管吸光度。

注意:每個(gè)測(cè)定管需要設(shè)置一個(gè)對(duì)照管,可以在不同對(duì)照管中加入不同樣品的粗酶液,然后集中進(jìn)行1min沸水浴處理

PPO計(jì)算:

1、血清、血漿或果汁PPO活性計(jì)算

單位定義:每分鐘每毫升樣品在每毫升反應(yīng)體系中使525nm吸光值變化0.01為一個(gè)酶活力單位

PPO(U/mL=(A測(cè)定-A對(duì)照)×反應(yīng)總體積÷(V液*×V樣*÷V樣總*) ÷0.01÷反應(yīng)時(shí)間

=80×(A測(cè)定-A對(duì)照)÷V液*

2、組織中PPO活力的計(jì)算

(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算:

單位的定義:每分鐘每mg組織蛋白在每毫升反應(yīng)體系中使525nm處吸光值變化0.01定義為一個(gè)酶活力單位。

PPO(U/mg prot)=反應(yīng)總體積(1200μl)÷樣本體積(150μl)÷反應(yīng)時(shí)間(10min)÷0.0(A測(cè)定-A對(duì)照)÷蛋白濃度(mg/ml)=80×(A測(cè)定-A對(duì)照)÷蛋白濃度(mg/ml

(2)按樣本鮮重計(jì)算:

單位的定義:每分鐘每g組織蛋白在每毫升反應(yīng)體系中使525nm處吸光值變化0.01定義為一個(gè)酶活力單位。

PPO(U/g 鮮重)=反應(yīng)總體積(1200μl)÷樣本體積(150μl)÷反應(yīng)時(shí)間(10min)÷0.0(A測(cè)定-A對(duì)照)÷樣本鮮重(g/ml=80×(A測(cè)定-A對(duì)照)÷樣本鮮重(g/ml

3、按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:

單位的定義:每分鐘每1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在每毫升反應(yīng)體系中使525nm處吸光值變化0.01定義為一個(gè)酶活力單位。

PPO(U/104 cell)=反應(yīng)總體積(1200μl)÷樣本體積(150μl)÷反應(yīng)時(shí)間(10min)÷0.0(A測(cè)定-A對(duì)照)÷細(xì)菌或細(xì)胞密度(104/ml=80×(A測(cè)定-A對(duì)照)÷500*

 

*V液:加入的血清、血漿或果汁的體積

*V樣:加入樣本體積

*V樣總:加入提取液體積

*500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)500萬

 

 

實(shí)驗(yàn)代做服務(wù):

ELISA試劑盒免費(fèi)代檢測(cè)

CCK8檢測(cè)

基因組DNA提取

 

蛋白相互作用分析

Western Blot

免疫組化

熒光定量PCR

動(dòng)物模型服務(wù)

流式細(xì)胞檢測(cè)

ROS氧化分析

激光共聚焦

DNA甲基化實(shí)驗(yàn)

細(xì)胞劃痕

鈣離子濃度檢測(cè)

掃描電鏡實(shí)驗(yàn)

microRNA測(cè)序

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

探針合成

ATP/ADP檢測(cè)

石蠟/冰凍切片

定點(diǎn)突變

線粒體膜電位(MMP)檢測(cè)

細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的測(cè)定

藥理毒理動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

 

免疫共沉淀

真核表達(dá)載體構(gòu)建

染色質(zhì)免疫沉淀CHIP

非標(biāo)定量(Label-free)實(shí)驗(yàn)

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